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求助 实验室无菌及培养箱无菌

时间:2024-02-03 09:06:09  来源:http://www.esdzt.com  作者:admin

一般都是在无菌室外设置准备室、培养室,物品通过传递窗进入无菌室。下面安徽人和净化为你提供的内容肯定对你有所帮助。

无菌实验室操作规程

一 日常管理

1 准备工作

实验前,准备齐当天所用物品(包括废液缸),并置2%新洁尔灭溶液(3000ml)及空盆于无菌间,开操作台和无菌室紫外灯30min。放臭氧15分钟后,再进无菌间操作。

2 无菌间操作

进无菌间后换拖鞋、穿工作服、戴口罩、帽子、手套,然后用新洁尔灭洗手;

将所用的试剂用新洁尔灭或75%酒精擦拭后放入操作台,撕封口膜,用酒精棉球擦拭瓶口,再在酒精灯火焰上烤,之后用止血钳夹住瓶塞取下;

在操作台内,瓶口尽量不应直立向上,在盖塞前烤塞子与瓶口(除酒精棉球瓶外),再盖严加封口膜取出;

做完实验,清理操作台,用新洁尔灭擦拭台面及操作台上的物品。

3 无菌间清扫

无菌室每周要彻底打扫一次,用新洁尔灭擦墙、门、仪器及桌面等;75%酒精擦窗、玻璃等;过氧乙酸擦操作台、出问题或准备要用的培养箱。

4 无菌服

冬天时一周一洗;夏天时一天一洗。按实验室值日生顺序轮流洗涤,并由上一人及时通知下一人。洗涤晾干,高压灭菌后放入无菌间紫外杀菌。

5 臭氧发生器

每晚最后离开实验室的,关电器、门窗等,并打开臭氧发生器定时一小时。

二 实验室物品处理

1新塞子的处理

新胶塞对细胞有一定的毒害作用,其处理方法为:

新胶塞 →洗衣粉洗→洗涤灵洗→晾干→20g/1000ml的NaOH煮30min→水冲洗→去离子水浸泡过夜→双蒸水冲洗→晾干→备用

有水沸腾时算起,煮30min。

2 接触细胞的用品的处理

用品→过氧乙酸浸泡过夜[20ml/10000ml过氧乙酸]→取出→洗涤灵擦洗→水冲→晾干→泡酸[洗液]→自来水浸泡过夜→去离子水冲洗→双蒸水冲洗→晾干→备用

3 未接触细胞的用品的处理

用品→自来水冲洗[可适当用洗衣粉或洗涤灵洗]→去离子水冲洗2~3次→双蒸水冲洗2~3次→晾干→包口→备用

滤器、瓶→自来水冲洗30min→去离子水冲洗→双蒸水冲洗→晾干→备用

三 细胞污染时培养瓶及培养箱的处理

1 细胞污染

细菌污染时培养基多出现浑浊,在镜下观察时多出现黑色跳动小点。

真菌多为霉菌污染时,初期为镜下可见圆形漂浮或贴辅的空心圆泡,后期可见明显霉斑,镜下可见菌丝为树枝状。

2 处理

细菌多用新洁尔灭(20ml/1000ml水)可适当加大浓度,浸泡24h以上。

真菌多用过氧乙酸(20ml/10000ml水)可适当加大浓度,浸泡24h以上。

3 培养箱处理

培养箱应拆下内部组件,彻底清洗,用过氧乙酸擦拭后再用新洁尔灭擦拭,然后用酒精擦拭,紫外照射30min,最后用75%的酒精(40℃,CO2为零)培养箱内部熏蒸3~4h;污染严重时要将其放入烘箱内100~200℃烘3~4h安装后再照紫外。

注:

Ⅰ 每次操作时要将培养箱彻底擦拭;

Ⅱ 每月对培养箱做一次AUTOSUART(具体操作见说明书)

4 培养间处理

要彻底打扫,擦拭,先用0.5%过氧乙酸擦一遍,大约10分钟后,用0.5%新洁尔灭再擦一遍,最后用过氧乙酸熏蒸消毒。方法为:向熏蒸槽内加入适量酒精,放上石棉网,取一个烧杯,加入100ml过氧乙酸和等量的蒸馏水,把烧杯放在石棉网,一起端进无菌室,并打开室内所有厨子和抽屉,点燃酒精开始熏蒸,中途可以检查酒精燃烧情况,如燃完可以视过氧乙酸剩余多少,再加入适量酒精,切忌烧干过氧乙酸。

注意事项

1 进出无菌间,无论什么事,都必须带一次性手套开门;

2 血清、双抗等不能照紫外的试剂,只接带进无菌间后用酒精棉球擦拭三遍;

3 无菌间内装消毒液的桶、盆必须专用;

4 所用抹布,在做完实验后要洗涤、高压灭菌,烘干后照紫外,从传递柜带进无菌间,所有能灭菌的均以此方式处理;

5 -70℃冰箱及液氮室钥匙由专人负责,除特殊情况,任何人不得随意拿用;平时也要先跟负责人请示;

6 实验操作分组时,各组使用各组的仪器设备,能分开用的要彻底分开;

7 为提高实验操作人员的关注程度,试验的每个步骤都要有相关纪录;

8 无论实验室有无污染,均要定期熏蒸,夏天一天一次,每次不必太长时间;

9 实验中遇到问题先查书、再找专家,切记勿盲目轻信;

10 私人衣物可以在实验室洗,但除无菌服外,禁止在实验室晾;

11 实验室内的试剂、相关工具等均有相应摆放位置及电子图示,勿乱放、并做好定期更新;

12 实验室内禁止带入任何食品;

13 在包滤器、滤瓶时,要包口,外面再包一层牛皮纸之后外面再包一层布,在高压灭菌后则不会进入水蒸气;

14 在配制试剂时所用的水为去离子、三重蒸馏水,现用现烧。

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